Ren Saposhnikovia divaricata-olja för ljus- och tvåltillverkning, grossistdiffusor, eterisk olja, ny för vassbrännardiffusorer

kort beskrivning:

 

2.1. Förberedelse av SDE

SD-rodstockarna köptes som torkade örter från Hanherb Co. (Guri, Korea). Växtmaterialet bekräftades taxonomiskt av Dr. Go-Ya Choi från Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Ett kupongprov (nummer 2014 SDE-6) deponerades i det koreanska herbariet för standard örtresurser. Torkade SD-rodstockar (320 g) extraherades två gånger med 70 % etanol (med 2 timmars återflöde) och extraktet koncentrerades sedan under reducerat tryck. Avkoket filtrerades, frystorkades och förvarades vid 4 °C. Utbytet av torkat extrakt från råa utgångsmaterial var 48,13 % (vikt/vikt).

 

2.2. Kvantitativ högpresterande vätskekromatografi (HPLC)-analys

Kromatografisk analys utfördes med ett HPLC-system (Waters Co., Milford, MA, USA) och en fotodioddetektor. För HPLC-analysen av SDE användes prim-O-glukosylcimifuginstandard köptes från Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ochsek-O-glukosylhamaudol och 4′-O-β-D-glukosyl-5-O-metylvisaminol isolerades i vårt laboratorium och identifierades genom spektralanalyser, främst med NMR och MS.

SDE-prover (0,1 mg) löstes i 70 % etanol (10 ml). Kromatografisk separation utfördes med en XSelect HSS T3 C18-kolonn (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Den mobila fasen bestod av acetonitril (A) och 0,1 % ättiksyra i vatten (B) med en flödeshastighet på 1,0 ml/min. Ett flerstegsprogram med gradient användes enligt följande: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) och 20–65 % A (23–40 min). Detektionsvåglängden skannades vid 210–400 nm och registrerades vid 254 nm. Injektionsvolymen var 10,0μL. Standardlösningar för bestämning av tre kromoner framställdes vid en slutlig koncentration av 7,781 mg/ml (prim-O-glukosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukosyl-5-O-metylvisaminol) och 31,125 mg/ml (sek-O-glukosylhamaudol) i metanol och förvarades vid 4 °C.

2.3. Utvärdering av antiinflammatorisk aktivitetIn vitro

2.3.1. Cellodling och provbehandling

RAW 264.7-celler erhölls från American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) och odlades i DMEM-medium innehållande 1 % antibiotika och 5,5 % FBS. Cellerna inkuberades i en fuktad atmosfär med 5 % CO2 vid 37 °C. För att stimulera cellerna ersattes mediet med färskt DMEM-medium och lipopolysackarid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) vid 1μg/ml tillsattes i närvaro eller frånvaro av SDE (200 eller 400μg/ml) i ytterligare 24 timmar.

2.3.2. Bestämning av kväveoxid (NO), prostaglandin E2 (PGE2), tumörnekrosfaktor-α(TNF-α), och produktion av interleukin-6 (IL-6)

Cellerna behandlades med SDE och stimulerades med LPS i 24 timmar. NO-produktion analyserades genom att mäta nitrit med hjälp av Griess-reagenset enligt en tidigare studie [12Utsöndring av de inflammatoriska cytokinerna PGE2, TNF-α, och IL-6 bestämdes med hjälp av ett ELISA-kit (R&D-system) enligt tillverkarens instruktioner. Effekterna av SDE på NO- och cytokinproduktion bestämdes vid 540 nm eller 450 nm med hjälp av en Wallac EnVision™mikroplattläsare (PerkinElmer).

2.4. Utvärdering av antiosteoartritaktivitetIn vivo

2.4.1. Djur

Hanråttor av typen Sprague-Dawley (7 veckor gamla) köptes från Samtako Inc. (Osan, Korea) och hölls under kontrollerade förhållanden med en 12-timmars ljus/mörkercykel vid°C och% luftfuktighet. Råttorna fick laboratoriefoder och vattenfri tillgångAlla experimentella procedurer utfördes i enlighet med riktlinjerna från National Institutes of Health (NIH) och godkändes av Animal Care and Use Committee vid Daejeon-universitetet (Daejeon, Republiken Korea).

2.4.2. Induktion av artros med MIA hos råttor

Djuren randomiserades och tilldelades behandlingsgrupper innan studien påbörjades (per grupp). MIA-lösning (3 mg/50μL av 0,9 % saltlösning) injicerades direkt i det intraartikulära utrymmet i höger knä under anestesi inducerad med en blandning av ketamin och xylazin. Råttorna delades slumpmässigt in i fyra grupper: (1) saltlösningsgruppen utan MIA-injektion, (2) MIA-gruppen med MIA-injektion, (3) SDE-behandlade gruppen (200 mg/kg) med MIA-injektion och (4) indometacin (IM-)-behandlade gruppen (2 mg/kg) med MIA-injektion. Råttorna administrerades oralt med SDE och IM 1 vecka före MIA-injektion i 4 veckor. Doseringen av SDE och IM som användes i denna studie baserades på de som använts i tidigare studier [10,13,14].

2.4.3. Mätningar av viktbärande fördelning på baktassarna

Efter artrosinduktion stördes den ursprungliga balansen i baktassarnas viktbärande förmåga. En funktionsnedsättningstestare (Linton Instrumentation, Norfolk, Storbritannien) användes för att utvärdera förändringar i viktbärande tolerans. Råttorna placerades försiktigt i mätkammaren. Den viktbärande kraft som utövades av bakbenet beräknades i genomsnitt över en 3-speriod. Viktfördelningsförhållandet beräknades med följande ekvation: [vikt på höger bakben/(vikt på höger bakben + vikt på vänster bakben)] × 100 [15].

2.4.4. Mätningar av serumcytokinnivåer

Blodproverna centrifugerades vid 1 500 g i 10 minuter vid 4 °C; sedan samlades serumet in och förvarades vid −70 °C fram till användning. Nivåerna av IL-1β, IL-6, TNF-α, och PGE2 i serum mättes med ELISA-kit från R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) enligt tillverkarens instruktioner.

2.4.5. Kvantitativ RT-PCR-analys i realtid

Totalt RNA extraherades från knäledsvävnad med hjälp av TRI-reagenset® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), omvänt transkriberades till cDNA och PCR-amplifierades med hjälp av ett TM One Step RT PCR-kit med SYBR-grönt (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Kvantitativ PCR i realtid utfördes med hjälp av Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-systemet (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Primersekvenserna och probsekvensen visas i tabell.1Alikvoter av prov-cDNA och en lika stor mängd GAPDH-cDNA amplifierades med TaqMan® Universal PCR-masterblandningen innehållande DNA-polymeras enligt tillverkarens instruktioner (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-förhållandena var 2 minuter vid 50 °C, 10 minuter vid 94 °C, 15 sekunder vid 95 °C och 1 minut vid 60 °C i 40 cykler. Koncentrationen av målgenen bestämdes med hjälp av den jämförande Ct-metoden (tröskelcykelantal vid korsningspunkten mellan amplifieringsdiagram och tröskel), enligt tillverkarens instruktioner.

FOB-pris:0,5–9 999 USD / styck

Minsta orderkvantitet:100 styck/stycken

Leveransförmåga:10000 styck/stycken per månad