Ren Saposhnikovia divaricata-olja för ljus- och tvåltillverkning eterisk olja för grossistspridare för vassbrännare

kort beskrivning:

 

2.1. Förberedelse av SDE

Jordstockarna av SD köptes som en torkad ört från Hanherb Co. (Guri, Korea). Växtmaterialen bekräftades taxonomiskt av Dr. Go-Ya Choi från Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Ett kupongprov (nummer 2014 SDE-6) deponerades i Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. Torkade rhizomer av SD (320 g) extraherades två gånger med 70 % etanol (med 2 h återflöde) och extraktet koncentrerades sedan under reducerat tryck. Avkoket filtrerades, lyofiliserades och lagrades vid 4°C. Utbytet av torkat extrakt från råa utgångsmaterial var 48,13 % (vikt/vikt).

 

2.2. Kvantitativ högpresterande vätskekromatografi (HPLC) analys

Kromatografisk analys utfördes med ett HPLC-system (Waters Co., Milford, MA, USA) och en fotodiod-arraydetektor. För HPLC-analysen av SDE,O-glucosylcimifugin standard köptes från Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ochsek-O-glukosylhamaudol och 4′-O-β-D-glukosyl-5-O-metylvisaminol isolerades i vårt laboratorium och identifierades genom spektralanalyser, främst genom NMR och MS.

SDE-prover (0,1 mg) löstes i 70 % etanol (10 ml). Kromatografisk separation utfördes med en XSelect HSS T3 C18-kolonn (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Den mobila fasen bestod av acetonitril (A) och 0,1 % ättiksyra i vatten (B) med en flödeshastighet av 1,0 ml/min. Ett flerstegsprogram användes enligt följande: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) och 20–65 % A (23–40 min). ). Detektionsvåglängden skannades vid 210–400 nm och registrerades vid 254 nm. Injektionsvolymen var 10,0μL. Standardlösningar för bestämning av tre kromoner framställdes vid en slutkoncentration av 7,781 mg/ml (prim-O-glukosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4'-O-β-D-glukosyl-5-O-metylvisaminol) och 31,125 mg/ml (sek-O-glukosylhamaudol) i metanol och hölls vid 4°C.

2.3. Utvärdering av antiinflammatorisk aktivitetIn vitro

2.3.1. Cellkultur och provbehandling

RAW 264.7-celler erhölls från American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) och odlades i DMEM-medium innehållande 1 % antibiotika och 5,5 % FBS. Celler inkuberades i en fuktad atmosfär av 5% CO2 vid 37°C. För att stimulera cellerna ersattes mediet med färskt DMEM-medium och lipopolysackarid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) vid 1μg/ml tillsattes i närvaro eller frånvaro av SDE (200 eller 400μg/ml) i ytterligare 24 timmar.

2.3.2. Bestämning av kväveoxid (NO), prostaglandin E2 (PGE2), tumörnekrosfaktor-α(TNF-αoch Interleukin-6 (IL-6) produktion

Celler behandlades med SDE och stimulerades med LPS under 24 timmar. NO-produktionen analyserades genom att mäta nitrit med Griess-reagenset enligt en tidigare studie [12]. Utsöndring av de inflammatoriska cytokinerna PGE2, TNF-αoch IL-6 bestämdes med användning av ett ELISA-kit (R&D-system) enligt tillverkarens instruktioner. Effekterna av SDE på NO och cytokinproduktion bestämdes vid 540 nm eller 450 nm med hjälp av en Wallac EnVision™mikroplattläsare (PerkinElmer).

2.4. Utvärdering av antiosteoartritaktivitetIn Vivo

2.4.1. Djur

Sprague-Dawley-hanråttor (7 veckor gamla) köptes från Samtako Inc. (Osan, Korea) och hölls under kontrollerade förhållanden med en 12-timmars ljus/mörker-cykel vid°C och% luftfuktighet. Råttor försågs med laboratoriediet och vattenad libitum. Alla experimentella procedurer utfördes i enlighet med National Institutes of Health (NIH) riktlinjer och godkända av Animal Care and Use Committee vid Daejeon-universitetet (Daejeon, republiken Korea).

2.4.2. Induktion av OA med MIA hos råttor

Djuren randomiserades och tilldelades behandlingsgrupper innan studien inleddes (per grupp). MIA-lösning (3 mg/50μL av 0,9% saltlösning) injicerades direkt i det intraartikulära utrymmet i höger knä under bedövning inducerad med en blandning av ketamin och xylazin. Råttor delades slumpmässigt in i fyra grupper: (1) saltlösningsgruppen utan MIA-injektion, (2) MIA-gruppen med MIA-injektion, (3) den SDE-behandlade gruppen (200 mg/kg) med MIA-injektion och (4 ) den indometacin-(IM-)-behandlade gruppen (2 mg/kg) med MIA-injektion. Råttor administrerades oralt med SDE och IM 1 vecka före MIA-injektion under 4 veckor. Doseringen av SDE och IM som användes i denna studie baserades på de som använts i tidigare studier [10,13,14].

2.4.3. Mått på baktassens viktbärande fördelning

Efter OA-induktion stördes baktassarnas ursprungliga balans i viktbärande förmåga. En inkapacitanstestare (Linton instrumentation, Norfolk, Storbritannien) användes för att utvärdera förändringar i den viktbärande toleransen. Råttor placerades försiktigt i mätkammaren. Den viktbärande kraften som utövades av bakbenet beräknades i medeltal över en 3 s period. Viktfördelningsförhållandet beräknades med följande ekvation: [vikt på höger bakben/(vikt på höger bakben + vikt på vänster bakben)] × 100 [15].

2.4.4. Mätningar av serumcytokinnivåer

Blodproverna centrifugerades vid 1 500 g under 10 minuter vid 4°C; sedan samlades serumet upp och förvarades vid -70°C fram till användning. Nivåerna av IL-1βIL-6, TNF-αoch PGE2 i serumet mättes med användning av ELISA-kit från R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) enligt tillverkarens instruktioner.

2.4.5. Kvantitativ RT-PCR-analys i realtid

Totalt RNA extraherades från knäledsvävnad med hjälp av TRI-reagens® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), omvänt transkriberades till cDNA och PCR-amplifierades med ett TM One Step RT PCR-kit med SYBR-grönt (Applied Biosystems) , Grand Island, NY, USA). Kvantitativ PCR i realtid utfördes med användning av Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-system (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Primersekvenserna och probsekvensen visas i tabell1. Alikvoter av prov-cDNA och en lika stor mängd GAPDH-cDNA amplifierades med TaqMan® Universal PCR-masterblandningen innehållande DNA-polymeras enligt tillverkarens instruktioner (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-förhållandena var 2 min vid 50°C, 10 min vid 94°C, 15 s vid 95°C och 1 min vid 60°C under 40 cykler. Koncentrationen av målgenen bestämdes med användning av den jämförande Ct-metoden (tröskelcykelnummer vid korsningspunkten mellan amplifieringsdiagram och tröskelvärde), enligt tillverkarens instruktioner.

FOB-pris:0,5–9 999 USD/styck

Min.beställningskvantitet:100 stycken/stycken

Försörjningsförmåga:10 000 stycken/stycken per månad